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凝膠過濾(分子篩層析或凝膠層析)原理和實(shí)驗(yàn)方法

更新時間:2013-09-23      點(diǎn)擊次數(shù):8971

凝膠層析又稱為分子篩層析或凝膠過濾。具有分子篩作用的物質(zhì)很多,如浮石、瓊脂 、瓊脂 糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。以葡聚糖凝膠應(yīng)用zui廣,商品名是sephadex型號很多,從G10 到G200 ,它的主要應(yīng)用范圍是:①分級分離各種抗原與抗體 ;② 去掉復(fù)合物中的小分子物質(zhì)。如除鹽、熒光素和游離的放射性同位素 以及水解的蛋白質(zhì)碎片;③分析血清 中的免疫復(fù)合物;④分子量的測定。
(一)原理
凝膠是一種多孔性的不帶表面電荷的物質(zhì),當(dāng)帶有多種成分的樣品溶液在凝膠內(nèi)運(yùn)動時,由于它們的分子量不同而表現(xiàn)出速度的快慢,在緩沖液洗脫時,分子量大的物質(zhì)不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi),而在凝膠間幾乎是垂直的向下運(yùn)動,而分子量小的物質(zhì)則進(jìn)入凝膠孔內(nèi)進(jìn)行“繞道”運(yùn)行,這樣就可以按分子量的大小,先后流出凝膠柱,達(dá)到分離的目的。
(二)葡聚糖凝膠的種類與性能
葡聚糖又名右旋糖酐,在它們的長鏈間以三氯環(huán)氧丙烷交聯(lián)劑交聯(lián)而成。葡聚糖凝膠具有很強(qiáng)的吸水性,交聯(lián)度大,吸水性小,相反交聯(lián)度小,吸水性大。商品名以SephadexG表示,G值越小,交聯(lián)度越大,吸水性越小,G值越大,交聯(lián)度越小,吸水性就越大,二者呈反比關(guān)系,G值大約為吸水量的10倍。由此可以根據(jù)床體積而估算出葡聚糖凝膠干粉的用量。
表 1-8 Sephadex1的種類與特性

G25 、G50 有四種顆粒型號:粗(100µ~300µ)、中(50µ~150µ)、細(xì)(20µ~80µ)和超細(xì)(10µ~40µ)。G75 ~G200 又有兩種顆粒型號:中(40µ~120µ),超細(xì)(10µ~40µ)。顆粒越細(xì),流速越慢,分離效果越好。
表1-9 DEAE-纖維素與 Sephadex1比較

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